簡介
微生物在自然界中呈混雜狀態(tài)存在，要獲得所需菌種，必需從中把它們分離出來。在保存菌種時 不慎受到到污染也需予以分純。微生物分離和純化的方法很多，但基本原理卻是相似的，即將待分離的樣品進(jìn)行一定的稀釋，并使微生物的細(xì)胞（或孢子）盡量以分 散狀態(tài)存在，然后使其長成一個個純種單菌落。然而上述工作又離不開接種，即將一種微生物移到另一滅過菌的培養(yǎng)基上的過程。
原理
微生物的接種分離和培養(yǎng)是做細(xì)胞代謝分析和體外實(shí)驗的基本步驟之一，接種分離的好壞直接影響微生物的培養(yǎng)以及后續(xù)的實(shí)驗操作和結(jié)果（1）用于細(xì)胞分離（2）細(xì)胞純化（3）細(xì)胞增殖培養(yǎng)。
材料與儀器
大腸桿菌 枯草桿菌 金黃色葡萄球菌 酵母菌 來蘇爾 石炭酸溶液 福爾馬林 牛肉膏 蛋白胨 恒溫培養(yǎng)箱 接種環(huán) 酒精燈
步驟
1、微生物接種：指將微生物純種或含菌材料轉(zhuǎn)移到另一營養(yǎng)基質(zhì)上的過程。根據(jù)不同的目的可以采用不同的接種方法，如平板劃線法，涂布法，傾注法等。
2、微生物分離：指依據(jù)微生物的特征，采用各種方法從含菌樣品中獲得由單一個體（如單一菌體或孢子）或一段菌絲生長繁殖形成的微生物群體的過程。常用的分離方法有平板劃線法，稀釋涂布法，平板分離法，稀釋傾注平板分離法和單細(xì)胞分離法。 平板分離法的基本原理包括兩個方面：
（1）選擇適合于待分離微生物生長條件，如營養(yǎng)、酸堿度、溫度和氧的要求或加入某抑制劑造成只利于該微生物生長的環(huán)境。
（2）微生物在固體培養(yǎng)基上生長形成的單個菌落可以是由一個細(xì)胞繁殖而成的集合體，因此可以通過挑取單菌落而獲得一種純培養(yǎng)。值得指出的是從微生物群體上生長形成的單個菌落可以并不一定保證是純培養(yǎng)。
3、微生物培養(yǎng)：指微生物被接種到營養(yǎng)基質(zhì)后，在一定條件下生長繁殖的過程，分需氧培養(yǎng)法和厭氧培養(yǎng)法。
注意事項
1. 在接種時，需要在酒精燈旁操作，以維持一個相對無菌的環(huán)境。接種環(huán)與試管口不得任意放在桌上或與其他物品相接觸。
2. 平板或斜面的劃線需要迅速、輕捷，不要劃破培養(yǎng)基。
3. 接種完畢后將接種環(huán)抽出，灼燒一下管口，塞上硅膠塞，塞硅膠塞時請勿用試管口去迎硅膠塞，以免試管在流動空氣中納入不潔空氣。
4. 做平板分區(qū)劃線分離時，劃完一小區(qū)，均勻?qū)⒔臃N環(huán)徹底灼傷滅菌，待冷卻后再劃下一小區(qū)。
5. 所有的培養(yǎng)器皿均需要嚴(yán)格滅菌。
常見問題
1. 菌落是由單個或少數(shù)細(xì)胞在固體培養(yǎng)基表面或里面生長繁殖所形成的肉眼可見的子細(xì)胞群體。菌落形態(tài)會因菌種不同或菌種相同但所用的培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度、PH值和時間等條件不同而存在不同程度的差異。若所用的培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和時間條件相同，則同一種菌所形成的菌落形態(tài)具有相對的穩(wěn)定性和統(tǒng)一性。
2. 純培養(yǎng)的確定除了觀察其菌落特征外，還要結(jié)合顯微鏡檢測個體形態(tài)特征后才能決定，有些微生物的純培養(yǎng)要經(jīng)過一系列的分離與純化過程和多樣性特征鑒定才能確定。
